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抗中性粒細胞胞漿抗體是一種以中性粒細胞和單核細胞胞漿成分為靶抗原的自身抗體?是部分原發性小血管炎的特異性血清學診斷工具,隨著國內建立并不斷完善、規范了抗中性粒細胞胞漿抗體的檢測方法,錯檢、漏檢情況不斷減少,國內ANCA相關小血管炎的發病率有明顯的上升趨勢。
一、ANCA相關血管炎檢測方法
《2018年ANCA相關血管炎檢測專家共識》指出: 建議臨床疑似AAV患者,采用IIF-ANCA聯合抗MPO抗體、抗PR3抗體檢測。而對于初診的臨床疑似MPA、GPA患者,可使用高敏感性和高特異性的抗MPO抗體、抗PR3抗體檢測方法進行檢測。若檢測結果為陰性,但臨床仍高度懷疑小血管炎,應使用其他免疫學方法和/或IIF-ANCA進行重復檢測。目前國內醫療機構ANCA相關血管炎的檢測都是采用以上意見:間接免疫熒光法(pANCA/cANCA)聯合其他方法學靶抗原(MPO/PR3)檢測。
二、ANCA(間接免疫熒光法)核型判讀
采用間接免疫熒光法檢測ANCA時,抗核抗體陽性(尤其是高滴度均質/顆粒型)會影響ANCA核型的區分,故抗原底物(人中性粒細胞)通常采用甲醛、乙醇兩種固定劑進行固定。乙醇固定的中性粒細胞可區分核周型pANCA和胞漿型cANCA,甲醛固定的中性粒細胞則可以排除ANA細胞核核型的干擾,通過觀察不同固定劑固定的中性粒細胞可準確判讀ANCA結果?,F將不同核型判讀方法分享如下:
1 pANCA(甲醛抵抗型)
pANCA(甲醛抵抗型)表現為甲醛固定的中性粒細胞呈胞漿顆粒狀熒光,有時可見分葉核間增強熒光染色;乙醇固定的中性粒細胞呈現圍繞核周平滑絲帶狀熒光,有時熒光向核內浸潤,通常乙醇片亮度高于甲醛片。多數情況下pANCA(甲醛抵抗型)對應靶抗原為MPO,故也稱為MPO型pANCA。
2 pANCA(甲醛敏感型)
pANCA(甲醛敏感型)表現為甲醛固定的中性粒細胞無熒光;乙醇固定的中性粒細胞呈現圍繞核周平滑絲帶狀熒光,有時熒光向核內浸潤,pANCA(甲醛敏感性)通常對應非MPO類的靶抗原,如乳鐵蛋白(LF)、組織蛋白酶G(Cath G)、殺菌性/通透性增強蛋白(BPI)等,也稱為非MPO型pANCA。
3 cANCA
cANCA表現為甲醛固定的中性粒細胞呈胞漿顆粒狀熒光染色,有時可見分葉核間熒光增強染色;乙醇固定的中性粒細胞核型同甲醛一致,但有時甲醛片與乙醇片亮度會有差異,cANCA對應靶抗原為PR3和BPI。
4 不典型ANCA
不典型ANCA包括不典型pANCA和不典型cANCA,不典型ANCA表現為甲醛固定的中性粒細胞呈弱胞漿型或陰性,乙醇固定的中性粒細胞呈胞漿均勻分布的熒光,不典型ANCA既不符合pANCA標準,也不符合cANCA判讀標準,在判讀時應注意排除ANA的干擾以及經治療后病人熒光減弱的情況。
5 aANCA
aANCA是pANCA和cANCA的混合核型,表現為甲醛固定的中性粒細胞可見胞漿顆粒狀熒光,乙醇則可觀察到胞漿顆粒和核周絲帶狀熒光同時出現,此類樣本較罕見。
6 ANA陽性干擾
高滴度的抗核抗體核型(尤其是細胞核核型如均質型、核顆粒型)會對乙醇固定的中性粒細胞熒光結果產生干擾,表現為均勻或彌散的塊狀,甲醛固定的中性粒細胞為陰性,若甲醛片出現胞漿顆粒狀熒光,則懷疑ANCA熒光為陽性,建議結合其他方法學靶抗原結果進行報告避免漏檢。
三、ANCA相關血管炎臨床特征
※ MPA:顯微鏡下多血管炎;GPA:肉芽腫性多血管炎;EGPA:嗜酸性肉芽腫性血管炎;MPO:髓過氧化物酶;PR3:蛋白酶3;
ANCA不僅在ANCA相關血管炎(AAV)中出現,也可存在于炎癥性腸病、自身免疫性肝病等其他自身免疫病,以及惡性疾病、感染性疾病及藥物誘導性血管炎等,我國AAV中MPO抗體陽性的MPA發病率最高,而PR3陽性的病人往往預后較差,若伴隨GBM抗體的出現,更多可能發展為終末期腎病,如新月體型腎病,病程后期難以治愈,故對AAV病人的早期診斷尤為關鍵。
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